Etrafımızda sıradan gibi görünen ama aslında sessizce bize çok şey katan isimsiz kahramanlar var.Proteinaz K, moleküler teşhis endüstrisinde "isimsiz kahraman"dır, ancak sektördeki "büyük ve güçlü" ile karşılaştırıldığında, proteinaz K o kadar düşük anahtardır ki, önemini uzun süre gözden kaçırmışızdır.Yeni taç salgınının ortaya çıkmasıyla birlikte proteinaz K'ya olan talep hızla arttı, yurt içi ve yurt dışındaki arz tüketimin çok gerisinde kaldı ve herkes birdenbire proteinaz K'nın ne kadar önemli olduğunu fark etti.
Proteinaz K'nın kullanımı nedir?
Proteinaz K, proteolitik enzim aktivitesine sahip bir serin proteazdır ve çok çeşitli ortamlarda (pH (4-12.5), yüksek tuzlu tampon, 70°C'lik yüksek sıcaklık vb.) aktiviteyi koruyabilir.Ayrıca proteinaz K'nın aktivitesi SDS, üre, EDTA, guanidin hidroklorür, guanidin izotiyosiyanat vb. tarafından inhibe edilmez ve belli miktarda deterjan da proteinaz K'nın aktivitesini arttırabilir. Tıbbi tedavide (virüs ve mikrobiyal dezenfeksiyon) ), gıda (et yumuşatma), deri (saç yumuşatma), şarap yapımı (alkol berraklaştırma), aminoasit hazırlama (tüylerin parçalanması), nükleik asit ekstraksiyonu, in situ hibridizasyon vb., proteinaz K uygulamaları bulunmaktadır.En yaygın kullanılan uygulama nükleik asit ekstraksiyonudur.
Proteinaz K, nükleik asitlere sıkı bir şekilde bağlanan histonlar da dahil olmak üzere numunedeki her türlü proteini enzimolize edebilir, böylece nükleik asitler numuneden serbest bırakılabilir ve ekstrakt içine salınabilir, böylece ekstraksiyon ve saflaştırmanın bir sonraki adımını kolaylaştırır.Viral nükleik asit tespitinde proteinaz K, virüs örnekleme çözeltisindeki önemli bileşenlerden biridir.Proteinaz K, taşıma ve tespit aşamasında daha güvenli olan virüsün kılıf proteinini kırıp etkisiz hale getirebilir;ek olarak proteinaz K, RNaz'ı da bozabilir, viral RNA'nın bozulmasını önler ve nükleik asit tespitini kolaylaştırır.
Proteinaz K'nın bir gecede ünü
İster bilimsel araştırma alanında ister IVD alanında olsun, nükleik asit ekstraksiyonu en temel deneydir, dolayısıyla proteinaz K her zaman çok önemli bir varlık olmuştur.Ancak geçmişte proteinaz K'nın rolü çok daha az biliniyordu.Bunun büyük bir kısmı proteinaz K'nın arz ve talep ilişkisinin çok istikrarlı olmasından kaynaklanıyordu.Çok az insan proteinaz K tedarikinin bir sorun olacağını düşünebilir.
Yeni taç salgınının patlak vermesiyle birlikte nükleik asit testlerine olan talep arttı.Haziran 2020 sonu itibarıyla Çin'de yaklaşık 90 milyon yeni taç testi tamamlandı ve bu sayı küresel ölçekte daha da endişe verici.Nükleik asit ekstraksiyon deneylerinde proteinaz K'nın çalışma konsantrasyonu yaklaşık 50-200 μg/mL'dir.Genellikle bir nükleik asit örneğinin ekstraksiyonu için yaklaşık 100 µg proteinaz K gerekir.Fiili kullanımda, nükleik asit ekstraksiyonunun etkinliğini arttırmak amacıyla, genellikle Proteinaz K artan miktarda kullanılacaktır.Yeni koronavirüsün nükleik asit tespiti, büyük miktarda proteinaz K talebini beraberinde getirdi.Proteinaz K'nın orijinal arz ve talep dengesi hızla bozuldu ve proteinaz K, bir gecede önemli bir salgın önleme malzemesi haline geldi.
Proteinaz K üretimindeki zorluklar
Salgının gelişmesiyle birlikte proteinaz K'nın önemli değeri insanlar tarafından değer görmeye başlamış olsa da, proteinaz K'nın aşırı düşük anahtarlılığı nedeniyle çok az sayıda yerli firmanın proteinaz K üretimine dahil olması utanç vericidir. proteinaz K üretimi kurmak istiyorum Üretim sürecinde proteinaz K'nın son derece özel bir protein olduğu keşfedildi.Proteinaz K'nın üretim kapasitesinin kısa sürede genişletilmesi son derece zordur.
Proteinaz K'nın büyük ölçekli üretimi aşağıdaki zorluklarla karşı karşıyadır:
1. Düşük ifade
Proteinaz K çoğu proteini spesifik olmayan şekilde parçalayabilir ve ekspresyon konakçı hücresinde ciddi toksisiteye neden olabilir.Bu nedenle proteinaz K'nın ekspresyon düzeyi genellikle çok düşüktür.Proteinaz K'yı yüksek düzeyde eksprese eden ekspresyon sistemlerinin ve suşların taranması genellikle daha uzun bir döngü gerektirir.
2. Pigment ve nükleik asit kalıntıları
Büyük ölçekli fermantasyon, büyük miktarda pigment ve konakçı nükleik asit kalıntısının ortaya çıkmasına neden olur.Bu safsızlıkları basit bir saflaştırma işlemiyle gidermek zordur ve karmaşık saflaştırma, maliyeti artırır ve geri kazanım oranını azaltır.
3. İstikrarsızlık
Proteinaz K yeterince stabil değildir, kendi kendini enzimolize edebilir ve koruyucu bir madde olmadan 37°C'de uzun süre stabil olarak saklanması zordur.
4. Çökelmesi kolay
Dondurularak kurutulmuş proteinaz K tozunu hazırlarken, dondurularak kurutulmuş tozdaki proteinaz K'nın katı içeriğinin büyük olmasını sağlamak için, yüksek konsantrasyonda dondurularak kurutulmuş bir koruyucu maddenin eklenmesi gerekir, ancak proteinaz K konsantrasyonu 20mg/mL ve üstüne ulaşırsa, kolaydır. Topaklanma bir çökelti oluşturur, bu da yüksek katı madde içeriğine sahip proteinaz K'nın dondurularak kurutulmasında büyük zorluklar yaratır.
5. Büyük yatırım
Proteinaz K, güçlü proteaz aktivitesine sahiptir ve laboratuvarda diğer proteazları hidrolize edebilir.Bu nedenle proteinaz K, araştırma, geliştirme ve üretim için özel üretim alanları, ekipman ve personel gerektirir.
XD BIOCHEM'in proteinaz K çözeltisi
XD BIOCHEM olgun bir protein ekspresyonu ve saflaştırma platformuna sahiptir ve rekombinant proteinlerin ekspresyonu ve saflaştırılması ile üretim süreçlerinin optimizasyonu konusunda zengin deneyime sahiptir.Bir araştırma ve geliştirme ekibinin hızlı bir şekilde oluşturulmasıyla proteinaz K'nın büyük ölçekli üretim sürecinin üstesinden gelindi.Dondurularak kurutulmuş tozun aylık üretimi 30 KG'dan fazladır.Ürün istikrarlı performansa, yüksek enzim spesifik aktiviteye sahiptir ve konakçı sitokrom ve nükleik asit kalıntısı içermez.XD BIOCHEM ile iletişim kurmaya hoş geldiniz Bir deneme paketi edinin (E-posta:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM'in teknik çözümleri şunları içerir:
Çoklu kopya plazmid entegrasyonu kullanılarak, proteinaz K'nın düşük ekspresyon seviyesi probleminin üstesinden gelen, 8g/L ekspresyon seviyesine sahip yüksek ekspresyonlu suşlar seçilir.
Çok adımlı bir saflaştırma işleminin kurulması yoluyla, konakçı sitokrom ve proteinaz K'nın nükleik asit kalıntıları, standart değerin altına başarıyla çıkarıldı.
Koruyucu tampon formülasyonlarının yüksek verimli bir şekilde taranması yoluyla, proteinaz K'yı 37°C'de stabil şekilde depolayabilen bir tampon seçildi.
Tarama tamponları, proteinaz K'nın yüksek konsantrasyonlarda toplanması ve çökelmesinin kolay olması sorununun üstesinden gelir ve proteinaz K'nın yüksek katı içerikli dondurarak kurutmanın temelini oluşturur.
XD BIOCHEM proteinaz K örneği
XD BIOCHEM proteinaz K stabilite testi: oda sıcaklığında 80 gün sonra aktivitede önemli bir değişiklik olmayacaktır
XD BIOCHEM proteinaz K stabilite testi: oda sıcaklığında 80 gün sonra aktivitede önemli bir değişiklik olmayacaktır.
XD BIOCHEM proteinaz K ve rakip ürünlerin nükleik asit ekstraksiyon etkisinin karşılaştırılması.Nükleik asit ekstraksiyonu sürecinde sırasıyla XD BIOCHEM ve rekabetçi proteinaz K kullanılır.XD BIOCHEM proteinaz K'nın ekstraksiyon verimliliği daha yüksek ve hedef genin Ct değeri daha düşüktür.
Gönderim zamanı: 31 Aralık 2021