4-Nitrofenil beta-D-galaktopiranozit CAS:200422-18-0

Etki: ONPG, özellikle β-galaktosidaz enziminin varlığını ve aktivitesini tespit etmek için kullanılan bir substrattır. β-galaktosidaz enzimi mevcut ve aktif olduğunda, ONPG'yi iki ürüne ayırır: o-nitrofenol ve bir galaktoz türevi. o-nitrofenolün açığa çıkması, spektrofotometre kullanılarak ölçülebilen sarı bir renk değişimine neden olur.

Uygulama: ONPG'nin moleküler biyoloji ve biyokimya araştırmalarında çeşitli uygulamaları bulunmaktadır:

β-galaktosidaz aktivitesinin belirlenmesi: ONPG, β-galaktosidaz enziminin aktivitesini ölçmek ve nicelendirmek için yaygın olarak kullanılır. Enzim aktivitesiyle doğru orantılı olan o-nitrofenol oluşum hızı, spektrofotometrik olarak ölçülebilir.

Gen ifadesi ve düzenlenmesi: ONPG, gen ifadesi ve düzenlenmesi çalışmalarıyla ilgili deneylerde sıklıkla kullanılır. Özellikle belirli promotörlerin kontrolü altındaki genlerin ifadesini incelemek için, yaygın olarak kullanılan lacZ füzyon sistemi gibi füzyon protein deneylerinde sıklıkla kullanılır. ONPG kullanılarak ölçülen beta-galaktosidaz aktivitesi, gen ifadesinin seviyesi hakkında bilgi sağlar.

β-galaktosidaz aktivitesinin taranması: ONPG, β-galaktosidazı kodlayan LacZ geninin varlığını ve işlevselliğini belirlemek için rekombinant DNA teknolojisinde kolorimetrik bir tarama yöntemi olarak kullanılabilir. Bu tarama yöntemi, ilgili geni içeren klonların belirlenmesine yardımcı olur.

Enzim kinetiği çalışmaları: ONPG, β-galaktosidaz enziminin kinetiğini incelemek için de kullanışlıdır. Farklı substrat konsantrasyonlarında enzim-substrat reaksiyon hızını ölçerek, Michaelis-Menten sabitleri (Km) ve maksimum reaksiyon hızları (Vmax) gibi kinetik parametreleri belirlemek mümkündür.