4-Nitrofenil beta-D-galaktopiranosid CAS:200422-18-0

Etkisi: ONPG, özellikle β-galaktosidaz enziminin varlığını ve aktivitesini tespit etmek için kullanılan bir substrattır.β-galaktosidaz enzimi mevcut ve aktif olduğunda, ONPG'yi iki ürüne ayırır: o-nitrofenol ve bir galaktoz türevi.O-nitrofenolün serbest bırakılması, bir spektrofotometre kullanılarak ölçülebilen sarı bir renk değişikliğine neden olur.

Uygulama: ONPG'nin moleküler biyoloji ve biyokimya araştırmalarında çeşitli uygulamaları vardır:

β-galaktosidaz aktivitesinin belirlenmesi: ONPG, β-galaktosidaz enziminin aktivitesini ölçmek ve nicelikselleştirmek için yaygın olarak kullanılır.Enzim aktivitesiyle doğru orantılı olan o-nitrofenol oluşum hızı spektrofotometrik olarak ölçülebilir.

Gen ifadesi ve düzenlenmesi: ONPG sıklıkla gen ifadesi ve düzenleme çalışmaları ile ilgili deneylerde kullanılır.Spesifik promotörlerin kontrolü altındaki genlerin ekspresyonunu incelemek için yaygın olarak kullanılan lacZ füzyon sistemi gibi füzyon proteini analizlerinde sıklıkla kullanılır.ONPG kullanılarak ölçülen beta-galaktosidaz aktivitesi, gen ekspresyonunun düzeyine ilişkin bilgiler sağlar.

β-galaktosidaz aktivitesinin taranması: ONPG, rekombinant DNA teknolojisinde β-galaktosidazı kodlayan LacZ geninin varlığını ve işlevselliğini belirlemek için kolorimetrik bir tarama yöntemi olarak kullanılabilir.Bu tarama yöntemi, ilgilenilen geni içeren klonların belirlenmesine yardımcı olur.

Enzim kinetiği çalışmaları: ONPG aynı zamanda β-galaktosidaz enziminin kinetiğinin incelenmesinde de faydalıdır.Farklı substrat konsantrasyonlarında enzim-substrat reaksiyonunun hızını ölçerek Michaelis-Menten sabitleri (Km) ve maksimum reaksiyon hızları (Vmax) gibi kinetik parametreleri belirlemek mümkündür.